敲低效果验证方法:
RT-PCR
检测mRNA,是否仍存在靶 mRNA?或是否敲低成功?
这种方法非常灵敏,但无法准确预测蛋白质水平。
蛋白质印迹实验
使用抗ti来检测样品中的靶蛋白表达以及多种相关蛋白质表达,从而观察靶蛋白敲除对其它蛋白质的影响。
免yi细胞化学法
可检测是否存在敲低蛋白。
其优势在于利用双重染色法,可同时检查敲除对其它蛋白质表达的影响以及其它蛋白质在细胞中的位置。
ROS是什么?ROS也就是活性氧(reactive oxygen species,ROS)指来源于氧的自由基和非自由基。ROS在细胞生命,应激和si亡中具介导作用,并且不同浓度的ROS在其中起着截然不同的作用,从而导致细胞命运的不同。因此对ROS的浓度或相对水平进行可靠的测量非常有必要。
实验仪器和材料
细胞培养基
胎牛xue清
青mei素/链mei素
胰酶
PBS
DMSO
活性氧(ROS)试剂盒
血球计数板
CO2培养箱
倒置荧光显微镜
实验步骤1、细胞传代培养:当细胞长至80-90%时,去除培养基,加入PBS洗1-2次,去除PBS后,加入1ml胰酶消化1-3min后,加入3ml完全培养基中和胰酶终止消化,将消化的细胞转移至15ml离心管中,1000rpm离心5min。倒掉上清后,加入3ml培养基重悬细胞,1:3传代至培养皿中培养。
2、将长到培养皿80%-90%的内皮细胞用胰酶消化下来,1000rpm离心,去除上清,加入完全培养基重悬细胞,将细胞分别种在6孔板中,每孔种1×106个细胞。3、待细胞贴壁后,使用不同的含药xue清的培养基培养细胞。3、待细胞贴壁后,使用不同的含药xue清的培养基培养细胞。4、48h后,加入DCFH-DA于培养基中,稀释倍数为1:1000。5、孵育1h后,直接将细胞置于荧光显微镜下拍照。
实验结果
动物膀guang炎模型构建方法膀guang炎:
大部分情况下,膀guang炎由细菌感ran所致,膀胱感ran可能引起疼痛并令人烦恼。如果感ran扩散至shen脏,可能发展为严重的健康问题。
膀guang炎还可能作为对某些yao物或放she疗法的反应出现。某些因素有时会刺激膀胱,例如卫生产品、sha精凝胶或长期使用导管,这也可能引发膀guang炎。膀guang炎还可能作为另一种疾病的并fa症出现。
实验材料
C57BL/6小鼠
1-2x108cfu/ml大肠杆jun悬液
24G留置针
注she器
10%水合氯醛
方法步骤1、小鼠称量体重后按照重量使用10%水合氯醛进行ma醉。
2、ma醉后的小鼠用胶布固定于板上
3、触摸小鼠下腹部,摸到鼓包时确定小鼠膀胱所在位置,轻柔按压膀胱,排空尿液。
4、使用碘酊消毒niao道口,使用合适的留置针润滑后从niao道外口插入膀胱。
5、成功后缓慢注入50微升大肠gan菌悬液,留置针可保留至小鼠su醒前,防止漏液6、注射完成后,小鼠放回笼中,等待自然su醒,正常饲养。实验案例
给药24小时后,形态学可见大量炎性细胞浸润
组织水肿,膀胱上皮脱落。